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    大腸桿菌轉化時免熱激及孵育的方法

    點擊次數:1757  更新時間:2015-06-04

       中山大學的徐曉鵬博士向大家介紹了一種質粒轉化大腸桿菌時免熱激及孵育的方法。

       背景:目前外源質粒轉化大腸桿菌的步驟,需要先將質粒和感受態細胞在冰上撫育半小時,然后42度熱激90秒,加液體培養基緩搖1個小時左右再離心涂板。其中熱激步驟溫度和時間要求嚴格,熱激后大量菌細胞死亡,還要經過液體培養基撫育才能涂板。

       這個方法我們一直在用,質粒可以成功轉進菌體中,只要感受態細胞沒有問題,其轉化率和使用熱激法差不多,而且若是新鮮制備的感受態細胞,轉化率甚至更高。可以省下42度水浴裝置的儀器,還節省了至少1個小時的時間。

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